什么是Meselson Radding重组模型？

基因靶位操作的原理与策略

汪亚平 朱作言

The Principle and Strategy of Gene Targeting

WANG Ya-Ping ZHU Zuo-Yan

(Institute of Hydrobiology,The Chinese Academy of Sciences,Wuhan430072)

基因靶位操作(gene targeting)是80年代发展起来的一项重要分子生物学技术, 是通过外源DNA与染色体DNA间的同源重组，定点修饰、改造基因组特定位点的技术 。

1 同源重组

同源重组是基因靶位操作技术的分子生物学基础
。DNA同源重组在基因转化和遗传多样性发生中具有重要作用 ，受到了众多研究者的重视。从60年代开始
，在真菌系统中对同源重组机制进行了系统研究〔1〕，相继提出了多个同源重组模型 。

1.1 Holliday 模型〔2〕

Holliday等60年代提出的模型是第一个被普遍接受的同源重组模型 ，该模型以杂合DNA链的形成和随后的DNA修复解释真菌中的基因转化现象
，从而建立了同源DNA顺序间遗传信息交换的基本概念
。Holliday模型中的基本要素，如Holliday结构和交叉平移等对以后的许多同源重组模型产生重要影响。Potter等〔3〕对DNA重组的电镜观察结果 ，为该模型的Holliday结构提供了直接证据 。

1.2 Meselson-Radding 模型〔4〕

Meselson和Radding 在Holliday模型的基础上作了一些改进，认为DNA单链的形成及其向相邻DNA双链的侵入为非对称产生
，提出Meselson-Radding 模型。DNA单链形成可在一条DNA双链中首先产生，随着缺刻处DNA链的修复合成 ，游离出的单链末端侵入相邻DNA双链中
，与同源部分配对结合，被替换的DNA链形成一个逐渐增大的D-loop
。D-loop断开后产生的单链末端交叉侵入相邻DNA双链中 ，DNA自由末端共价连接形成Holliday结构。Meselson-Radding模型首次将DNA合成与重组联系起来
，这种DNA杂合链形成机制似乎更贴切地解释了非对称重组现象〔1〕 。

1.3 双链断裂修复模型

在酵母系统的重组研究中，发现载体DNA双链断裂可大大提高同源重组的效率 ，Holliday和Meselson-Radding模型都不能很好地解释这一现象
。基于这一发现
，Szostak 等提出了双链断裂修复(DSBR)模型〔5〕。在这一模型中，重组发生在DNA双链断裂区 ，断裂区的修复以对应的同源DNA链为模板
，修复的断裂区实质上成为转化区域 。DNA末端共价连接，形成两个Holliday结构 ，每一结构都有两种解决方式，或形成交换双链
，或形成非交换双链
。基因转化不需要DNA杂合链的形成和以后的改错修复过程。DSBR模型与Meselson-Radding模型还有另一个重要区别，前者的双链断裂区是信息接受区域 ，后者的DNA断裂区是遗传信息的提供者 。

1.4 单链退火模型

1984年
，Lin等提出完全不同的单链退火(SSA)模型〔6〕
。在SSA模型中，重组在DNA双链断裂处开始 ，在单链特异性核酸外切酶的作用下
，断裂点两侧逐渐形成DNA单链区域，这一过程持续到两个断点处出现互补DNA单链。互补DNA单链退火 ，非互补末端被切除
，单链缺口修复连接，完成DNA重组 。SSA模型没有其它模型所需的双链DNA的识别配对过程 ，不形成Holliday结构作为重组的中间过渡形式
。因此
，重组毫不例外地产生DNA双链交换，并丢失非退火区域单链DNA顺序。该模型提供了理解同源重组机制的全新视角 。

除上述模型外 ，不同研究者提出了一引起其它重组模型。Rao等的研究发现，在RecA蛋白的参与下
，单链DNA分子进入DNA双螺旋主沟，在同源区域形成稳定的三链结构〔7〕
。其它研究小组也发现过类似的三链DNA结构 ，认为DNA分子的三链结构可能在同源序列识别和重组中起重要作用〔8〕。

同源重组除可在DNA分子间进行外
，还可在RNA分子间或RNA与DNA分子间进行 。Stuhlmann等研究发现，逆转录病毒RNA在逆转录中发生高频同源重组〔9〕 ，这一现象在其它RNA病毒中也被证实〔10, 11〕
。Derr等在酵母S. cerevisiae中的研究进一步发现
，RNA分子可通过cDNA途径介导基因组DNA同源重组，提出RNA介导重组模型(RNA-mediated recombination)〔12〕。RNA分子间及RNA介导的同源重组可能提供基因组变异的新途径 。

2 基因靶位操作

70年代后期和80年代中期 ，以酵母S. cerevisiae 为模式系统
，建立了基因靶位操作技术的基础〔13〕
。基因靶位操作技术的建立依赖于几个重要方面的突破：外源DNA导入酵母细胞方法的建立；有效选择标记基因(如LEU2和URA3基因)的开发利用和同源重组转化子筛选系统的建立；靶位载体同源序列DNA双链断裂提高同源重组效率现象的发现。模式研究确立了基因靶位操作的重要技术参数，并逐渐形成成熟的研究策略 。

2.1 插入型载体和置换型载体

基因靶位操作载体有两种类型 ，即插入型载体和置换型载体
，区别在于载体DNA同源序列双链断裂位点的位置不同
。插入型载体的断裂位点在同源目的顺序内，选择基因可在载体的任何位置 ，载体与染色体靶位点进行一次交换完成同源重组，其结果是整个载体整合到染色体靶位点上（图1, A）；置换型载体的断裂位点在同源目的顺序的两侧或外侧
，选择基因在同源目的顺序内，载体同源目的顺序与染色体靶位进行两次交换完成同源重组 ，重组的结果是由载体的同源目的顺序取代染色体靶位顺序（图1, B）。

图1 基因精细突变策略(A.进退策略;B.标记交换策略)

关于两种不同载体类型的同源重组效率
，有研究发现插入型载体有更高的重组效率，其重组机制接近于双链断裂修复重组模型 ，而置换型载体的重组机制尚不清楚〔14〕 。Deng等对鼠ES细胞的Hprt位点的22个不同载体序列进行了同源重组效率比较
，发现两类基因靶位操作载体并不存在重组效率上的差异〔15〕
。

2.2 基因剔除和基因精细突变

用传统的遗传学方法和体外生物化学方法研究基因表达调控和产物生理功能受到诸多因素的限制，基因靶位操作技术的出现 ，使体外突变的基因导入生物体基因组成为可能
，可在细胞和生物体水平上研究基因的表达调控及其生理功能。应用基因靶位操作技术定点改造基因组特定基因主要采用两种方式：基因剔除和基因精细突变 。

2.2.1 基因剔除 基因剔除是在体外进行目的基因的功能缺失突变，突变基因通过基因靶位操作方法导入染色体基因组中 ，剔除内源野生型基因
，实现染色体靶位基因的功能缺失突变。基因剔除主要采用两种方案：其一，在克隆的目的基因的5'端和3'端形成两个突变 ，每一突变将独立产生基因功能丧失，通过插入型载体
，将突变目的基因导入染色体基因组中
。这一方法要求在目的基因两端产生有效突变，特别是3'端的有效突变有较高的技术难度 ，突变基因产物往往保留部分功能活性
，因此，基因靶位操作前要对突变的有效性进行检测。目的突变基因和染色体靶位基因 ，串联的同源基因顺序可能二度重组
，产生恢复突变 。由于上述原因，这类基因剔除方案现已多不采用〔16〕
。其二 ，将选择标记基因直接插入载体目的基因中
，这一过程通常伴随目的基因顺序的部分丢失，从而产生插入和丢失突变。载体导入靶细胞前在目的突变基因顺序两侧断开 ，以置换型载体方式将突变基因导入染色体基因组中 。与插入型方案比较
，置换型载体方案目的基因体外突变方便，由于突变程度加剧 ，基因靶位操作前不需要突变的有效性检验，基因靶位操作转化子不易产生恢复突变
。

2.2.2 基因精细突变 基因剔除方法使基因组中特定基因产生功能缺失
，是研究某一基因的基本功能 、了解基因在细胞和胚胎发育过程中作用的有效方法。然而，基因结构与基因功能之间存在复杂的结构功能联系 。如人类遗传病发生的基础多是核苷酸水平上的突变 ，基因剔除方法尚不能很好地研究基因精细结构方面的变化
。另外
，基因剔除方法还存在一些潜在的不利因素，如滞留在基因组中的正向选择标记基因不仅会造成所在染色体区域较大范围的中断 ，而且它携带的启动子或 增强子也可能会使邻近基因的转录失调
，产生难以预料的表型〔17〕。在基因剔除方法的基础上，发展了多种改进策略 ，以满足基因精细结构研究的需要 。

(1)进退策略: 进退策略由Hasty和Valancius首先提出
，它包括两次同源重组过程
。第一次以插入型载体同源重组到基因组靶位点中，完成目的突变基因和标记基因的导入 ，在选择培养基中得到转化细胞克隆。第二次同源重组在基因组中的目的突变基因和染色体靶位基因之间自发产生
，其结果是载体骨架
、标记基因和一个同源基因顺序环出，基因组中可能保留导入的目的突变基因 ，这一自发性同源重组过程称之为回复 。回复的频率视不同染色体靶位点而有所差异〔17〕。回复转化子在相应选择培养基中筛选克隆
。用PCR或Southern杂交方法可检测回复转化子是否包含目的突变基因(图1, A)。Hasty等应用进退策略，在鼠ES细胞同源异型基因族Hox-2.6基因3'端引入一个翻译终止码
，得到短截43个氨基酸的突变蛋白〔17〕 。Valancius等采用类似的方法，在鼠ES细胞Hprt-中插入了一个4碱基的插入突变〔18〕
。

(2)标记交换策略: 1993年 ，Askew等提出一个新的基因组定点突变策略〔19〕
，即标记交换策略。它包括两个过程，首先 ，用置换型载体将选择标记基因导入基因组靶位点
，在相应的选择培养基中筛选转化子细胞克隆 。第二步将目的突变基因顺序以置换型载体导入靶细胞中，在选择培养基中得到同源重组转化子 ，实现染色体靶位基因的定点突变
，同时剔除靶位基因中原先插入的选择标记基因（图1, B）
。

Askew等采用标记交换策略，在鼠ES细胞基因组非选择性基因α2异构Na, K-ATP酶基因中引入两个密码子突变和3个无表型突变〔19〕。标记交换策略中 ，第一步选择基因的标记和第二步目的突变基因置换具有相对独立性
，被标记的细胞系可与多种目的突变基因进行交换，因此 ，应用此策略可建立染色体靶位基因的多种遗传缺陷动物模型，在基因结构与功能研究中具有重要意义 。

(3)Cre-loxP重组系统策略〔20〕: Gu等提出的Cre-loxP重组系统策略是进行基因组定点突变的新途径
。Cre-loxP重组系统包括Cre重组酶和loxP位点两个部分
，Cre重组酶由大肠杆菌噬菌体P1的Cre基因编码，loxP位点是Cre酶作用的特异性重组位点 ，由两个13-bp的反向重复顺序和8-bp间隔区域构成。Cre重组酶可切除同向重复的两个loxP位点之间的DNA片段和一个loxP位点
，保留一个loxP位点〔21〕 。Cre-loxP重组系统可在哺乳类细胞和转基因鼠中介导loxP位点特异性重组〔22, 23, 24〕
。Gu等进一步提出由同源重组和位点特异性重组组成的两步重组策略，第一步 ，通过置换型载体进行同源重组
，向基因组靶位点引入选择标记基因，并在其两侧引入两个同向排列的loxP位点。第二步 ，通过Cre重组酶介导的loxP位点特异性重组
，切除位于两个loxP位点之间的所有顺序，而位于其外侧的结构顺序则均被保留 。这一策略可通过位于两个位点之间或之外的结构顺序的不同设计 ，达到对靶位基因不同的修饰结果。Gu等在鼠ES细胞中首次应用该策略
，定点缺失突变了免疫球蛋白重链基因中的JH～Eμ顺序，并通过胚胎细胞嵌合体技术 ，得到该基因突变型小鼠
。Cre-loxP重组系统除介导特异性缺失功能外，还具有介导定点整合的重要特性。已有研究证实
，Cre-loxP重组系统可介导外源DNA向病毒载体中的定点整合〔25〕 。应用Cre-loxP重组系统可以精确预定DNA缺失的片段长度，并可使之在很大范围内变化
。在表达Cre重组酶的胚胎细胞中 ，几乎所有的loxP位点间的顺序被切除〔26〕。另外
，与其它策略相比，转化的ES细胞经历的筛选时间较短 ，对ES细胞的胚胎重建能力影响较小〔20〕 。基于上述特点
，这一策略在研究基因顺式调控元件方面具有重要意义
。

2.3 哺乳类细胞中的基因靶位操作

基因靶位操作技术应用于哺乳类细胞经历了两个时期。早期的研究着眼于外源标记基因的同源重组，最初的研究中 ，将两个具不同缺失突变的neo基因共转染细胞
，两个不同缺限型neo 基因同源重组，形成一个野生型neo基因和一个双重突变的neo基因 ，并随机整合到细胞基因组中
，产生G418抗性细胞克隆 。进一步的研究发现，使其中的一个转化载体线性化可大大提高G418抗性细胞克隆数目 ，这和在酵母基因靶位操作中看到的情形一致
。这些研究结果显示，外源DNA在哺乳类细胞中能进行高效率的同源重组〔16〕。为进一步研究外源DNA顺序与染色体DNA顺序间的同源重组效率
，将缺陷型标记基因以随机重组的方式整合到细胞染色体基因组中，如neo和HSV-tk等基因 ，建立基因组中可选择的标记基因靶位 。在上述转化细胞中导入该标记基因的另一类型突变顺序
，在相应的选择培养基中筛选重组子克隆
。研究证实，导入细胞内的外源DNA顺序可与内源靶位DNA顺序进行同源重组 ，但同源重组率极低
，大约在10-5～10-6之间。

另一类模型研究则以哺乳类细胞内源可选择标记基因作为定点突变的靶位 。Hprt基因是一个理想的内源标记基因，Hprt基因与X染色体连锁 ，在雄性胚胎来源的ES细胞中以单拷贝存在
，因此，只需要单一拷贝基因突变即可获得可选择性表型。Hprt+细胞和Hprt-细胞可分别在HAT培养基和6-TG培养基中筛选
。Doetschman等应用基因靶位操作技术 ，成功地修复了小鼠Hprt- 突变型ES细胞
，在HAT培养基中获得Hprt+细胞，并证实野生型突变由基因同源重组所至 ，同源重组效率为1.4×10-6[〔30〕。由于Hprt基因突变表型可以直接筛选，该基因被用于多种基因靶位操作模型研究〔31, 32〕 。

哺乳类细胞基因靶位操作面临两大困难〔33〕
。一方面
，哺乳类细胞基因组庞大(109bp以上)，比酵母复杂得多 ，加之哺乳类细胞培养技术上的限制
，哺乳类细胞中基因靶位操作成功率极低；另一方面，哺乳类细胞似乎有极强的随机整合外来DNA片段的能力 ，同源重组与非同源重组的比率大约为10-3～10-4 〔29, 30, 31, 34, 35〕。因此
，建立高效可行的基因靶位操作转化子筛选系统，是哺乳类细胞基因靶位操作的重要前提和技术保障 。

作者单位：中国科学院水生生物研究所,武汉430072

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孤岛危机1怎么弄秘籍

本田思域Type?R ，如精神领袖般贯穿于九十年代以后的思域历史
，它传承于思域Si或者SiR型号，虽然从第五代开始 ，思域就开始成为第二辆拥有DOHC?VTEC引擎的高性能车型（其实是CR-X?EF8）
，并命名为思域SiR，但这始终跟后来1992年正式发布的NSX?Type?R车型在造车理念上有所区别 ，于是，从第六代开始
，思域通过减轻车身重量、配以B16B引擎，得以挂上红色本田徽章 ，成为第三辆拥有“R铭牌”的本田高性能特别型号
。而对于Type?R应该如何理解的问题？国内很多车友车迷都将注意力集中在高性能引擎
，总在评论引擎输出如何强大之类，甚至将“红章 ”和“红顶引擎
”等同在一起。但以笔者的见解：“Type?R”的第一层含义是操控性能 ，这也表现在所有的Type?R车型相对于量产型号都要进行大幅减重
，甚至许多新车上连音响都列作选配件；引擎的高出力只是辅助操控的一环，或者说让整体驾控性能进一步提升的辅助 。

图：1992年11月27日推出的NSX-R ，也是Type?R车型的元祖
，引擎依然是C30A，所以车架代号为NA1 ，主打轻量化的高操控性
，本田的精髓是：操控与动力相得映彰的理念，而非单纯的“本田引擎 ”这么肤浅
。

图：1995年推出的Integra型格Type?R是第二辆挂着红色徽章的车型 ，该车分为前后期版，外观上最大的分辨处是轮圈
，前期四孔 、后期五孔。

第一辆Type?R是1992年的NSX（NA1），第二辆则是1995年的第一版代号DC2/DB8的Integra?Type?R ，第三辆则是1997年的?基于第六代思域上研发的Type?R车型则到了1997年8月22日才正式发表
，其使用的引擎则是在B16A基础上大幅改良的B16B，峰值马力高达185匹/8200转 ，成为当时首屈一指的自然吸气引擎
，可惜，代号EK9的第一代Civic?Type?R仅出产过右驾版本 ，我们这些左驾市场基本无缘 。但值得庆幸的是
，NSX只推出过1992年的NA1版和2002年的NA2版后宣告“R徽章
”历史结束；Integra型格虽然在2001年合并了Prelude车系并推出深受好评的DC5?Type?R，但也好景不长地在2006年告终；至于雅阁的Euro?R嘛 ，虽然后来在2002年推出了搭载K20A的CL7
，但也还是在2008年退出历史舞台
。而今仅存的Type?R果实，只能通过Civic这个车系不断繁衍 ，1997年的EK9是第一代，第二代借用欧规思域车架发展出EP3
，第三代开始放弃Hothatch思路及架构，在日规思域FD1基础上 ，发展出搭载K20A引擎的FD2?Type?R；而同期的2007年
，EP3的继任车款名为FN2，使用放大版飞度底盘进行开发 ，同样以K20A作为动力系统
，FD2于2010年停产
、FN2于2012年停产后，思域的“R徽章”开始隐退江湖 ，看到一众欧洲曾经的手下败将们“山中无老虎 ”的姿态横行后
，本田终于按捺不住，于2015年重新在欧规第九代思域FK上试用自家的新武器：K20C地球梦涡轮引擎 ，也直接为后来的2017年发布的第十代思域Type?R（FK8）作铺垫。

图：代号EK9的Civic?Type?R发布于1997年8月22日
，使用一台经过改良的B16B引擎，峰值马力185匹 ，而车重仅有1040公斤，前后均采用双摇臂悬挂设计
，是一辆车尾动态比车头稍稍快一点儿的前驱车 。

图：代号EP3的思域Type?R由英国生产，使用与同期DC5相同的K20A引擎 ，但输出稍低
，该车很多配件改装件能与DC5通用，也是相当受欢迎的一代。

图：与FD2同年推出的Mugen?RR ，堪称终极改良版
，限量300台，开卖10分钟便估清 ，成为一时佳话
。马力240匹
，总重比普通FD?Type?R轻了15公斤。

如果这么捋顺一下思域Type?R的五代车型六款车型不难发现，他们各自的传承关系：日规系统的EK9由EP3接替、EP3由FD2接替 、FD2由FK8接替；欧规系统的EP3由FN2接替、FN2由FK2接替
、FK2停产后归于FK8 ，至于美规系统
，那就是Si和Type?R的传承了 。由此可见，曾经见过不少国内车媒拿着FK2跑去跟祖国版的FD2对比 ，拜托，他俩不是一路的好吗？！理由很简单
，FD2属于纯种日规版，国内的FA1改成FD2需要很多修改 ，上至引擎波箱、下至副车架前桥等都不同
，而且车身刚性完全两回事之下，用一台基于飞度版的扭力梁车架 、改良自上代FN2而研发出来的FK2 ，等于FK2虽然与FK8都叫Type?R
、都是FK车架代号
，但两者的车架底盘完全不同是一个道理
。所以，真要看出FK2的进步 ，应该跟FN2对比。

图：应该说
，FK2这一代Type?R的爹是这台欧规的FN2，因为他们两者的底盘均来自飞度为代表的脉络 ，FN2其实就是一辆三门揭背版的K20A飞度也不为过 。严格来说
，FN2这一代欧规思域Type?R是第一次正式的左驾版，虽然EP3时代也有左驾 ，但即使在相同配置下，左驾版的EP3名为Si而非Type?R
。

作为第五辆思域掌门人身份的Type?R车型
，不要说马后炮，自推出之日起 ，笔者就觉得这仅仅是一个“过客”
，或者说它只是一个试验品，果不其然 ，仅仅生产了不到一年便宣告停产
，并将其上面测试过的新科技全数移植到第十代思域的五门揭背型号上，取名FK8。而现在再看FK2上的那两大重点新玩意：一个是K20C1引擎、一个是全新的变种麦弗逊前悬挂 ，都是让FK2上市前将雷诺梅甘娜RS?275?Trophy-R拉下“最速前驱车
”的利器 。

图：?撇除外观 、布置之类
，FK2的最大亮点是新引擎和新前悬挂
。

先说K20C1引擎，时至今日 ，K20C系列引擎已经发展出三个量产涡轮增压子型号和一个自然吸气赛车用子型号（K20C2）
，分别是两代思域Type?R上均使用的K20C1
、广汽本田冠道上那台K20C3（272匹）和美规雅阁2.0T上那台K20C4（252匹）。K20C1引擎属于本田K系列引擎中的最新版本，其发布于2015年 ，由美国俄亥俄州本田工厂生产，它脱胎于久负盛名的高性能版K20A
，依然采用开放式水道设计，但其缸盖部分与前代有很大不同 ，首先是气门夹角从K20A的51°缩减为35°
，目的是要留出位置布置缸内直喷系统，同时 ，因为排气道如同R系列引擎一样被收纳在缸盖内
，所以其配气系统的宽度缩减也能让整个缸盖不至于太宽，可变气门升程系统布置于排气侧凸轮上 ，而可变气门正时系统VTC则进排气凸轮轴均配备
，于是便组成了地球梦版本的i-VTEC系统，而之所以只在排气凸轮轴配备i-VTEC系统 ，其最大的原因是通过改变排气气流的流速及多寡而令涡轮增压器在各段转速下的工作效能更高
，因此可以判断，K20C1引擎上的i-VTEC系统已经不再是B16B时代那种仅仅追求更多空气进入燃烧室而产生“爆TEC”观感的思路了 ，而是变成了涡轮增压器的辅助设备，等于那个“电子拉煲 ”（废气旁通阀）等等的地位 。

K20C1的一些其他参数：

引擎管理：Bosch?MED17

空气流量：MAP进气压力+MAF空气流量计

涡轮增压器：Garrett

增压值：持压为0.9?Bar、瞬压达1.1?Bar
。

变速箱：六速手排

1档：3.625

2档：2.115

3档：1.529

4档：1.125

5档：0.911

6档：0.734

尾牙：3.842

理论极速：302.77km/h

原厂公布：268km/h（6档状态）

图：K20C1的缸盖设计与K20A大有不同
，首先是下方的排气歧管被整合到缸盖体内，涡轮本体直接安装于缸盖上的设计与普通的有很大不同。（来源于网络 ，版权归原作者 。）

图：由此可见K20C1的开放式水道设计和缸内直喷机构
，将活塞行程稍稍减少也是为了迁就这个布局。（来源于网络，版权归原作者
。）

图：涡轮增压器位于前方 ，涡轮废气侧泄压阀由电子阀负责开启
，增压值控制得更为稳定。（来源于网络，版权归原作者 。）

再者 ，K20C1虽然源自高转大马力取向的自吸K20A/Z
，但其内部参数跟K20A是有轻微不同的，首先是标称排气量不同 ，K20A为1998cc 、而K20C1只有1995cc
，缸径都是86mm
、但K20A的冲程是86mm、而K20C只有85.9mm，不要小看这0.1mm的差别 ，因为缸盖上的燃烧室设计完全不同之下，K20A的压缩比可以高达11.5:1
，而K20C1的压缩比只有9.8:1，而因有涡轮增压的帮助 ，所以K20C1的峰值马力达到了306匹/6500转（轮上马力约240匹）
，扭力高达400牛米/2500转，相比于K20A的8000转的221匹和215牛米扭力要到6100转才奉上的表现 ，K20C1更适合日常使用
，2500转的扭力峰值也能让“翻脚感
”比K20A高一大截，笔者不是喜新厌旧 ，相反
，我个人而言更享受K20A那种随时能亢奋的驾驶感，但是 ，如果要满足日常适用性作为出发点的话
，K20C1给人的友善度大幅超越FD2上的K20A
。

图：英国Eventuri推出的碳纤维进气套件，直接从雨刮器之前取新鲜空气 ，经测试能令最大马力增加18~20匹。而这个设计让人想起了当年的EP3 、FD2也是类似的改法 。

另外一个全新的科技就是名为Dual?Axis?Strut?Front?Suspension?System的前悬挂系统，在FK2测试完后
，目前现役的在2017年推出的FK8上则继承了此套系统并于后轮的复合多连杆形式搭配，获得更强大的操控性能
。这个新型的前悬挂如果简单地理解 ，就是一种变种式的麦弗逊形式
，或者可以称为超级麦弗逊形式，其最大的作用就是消除大马力前驱车的“扭力转向”问题 ，毕竟本田已经定下了一台K20C1给FK2用
，306匹马力加上没有四驱辅助，要承受400牛米扭力输出谈何容易 ，总不能一起步就往右边走吧？传动副轴可以消除一点
，在K20A时代已经在使用，但最大限度的消除 ，除了标配机械式LSD外
，还能通过新悬挂获得大幅改正。

借用一张官图说明吧，左方是FK2和FK8的前悬挂 ，也就是超级麦弗逊的剖视图，右方则是普通的麦弗逊
，可以看见，两者有一个名为“Spindle?Length ”轮胎中心到转向中心的距离被大幅缩小 ，“Steering?Axis
”轮胎转向中心线也从避震机处移到了新款羊角（Steering?Knuckle）上
，而图中最关键的变化之一就是“Scrub?Radius”这个变形量能被有效抑制，因为它与轮胎中心线的距离和夹角的减少 ，便有利于车辆在加速和制动时的方向盘稳定性
，也就是说，无论是引擎大扭力输出
、还是重踩刹车 ，新羊角设计都能令方向盘的安定性增加
，根据英国本田给出的测试数据能提升50%的安定性 。当然了，有得必有失 ，新型羊角的设计虽有助安定性
，但其整体重量也增加了10公斤，不过这种取舍 ，相信谁都宁愿选择安定性表现
。

图：再借用一张网图说明一下这套新的先进麦弗逊结构吧，其实就是将外接一个转向专用羊角
，从而改变了悬挂中的一些几何参数。（来源于网络，版权归原作者 。）

虽然新的FK2获得了完全有别于过去NA时代的前辈们的动力表现和操控体验 ，但其一些细节上的改变也是令人感觉耳目一新的
，例如配合新羊角而出现的5H120的Hub头在过去的本田5H114.3尺寸上是个全新的设定，当然这也是为了应付更庞大的动力输出使然 ，前Camber为0.6°、后Camber为1°
，比较可惜地，因为前后的硬件配置都不怎么支持“可设定 ” ，所以暂时就只能顺从原厂了
。制动系统来自Brembo代工
，前制动碟为351mm 、后制动碟为305mm。

原厂单颗重量达到11公斤的19寸轮圈被同尺寸的Mugen?MFC锻造产品取代（19×8.5J），每颗重量下降至8公斤 ，ET值则从60mm减少为53mm
，也就是稍稍往外凸出了7mm，轮胎尺寸维持原厂的235/35R19 ，而很多车友关心的单颗售价约为人民币10600元左右，估计连上关税等
，会贵20~30%左右 。

图：日本车基本都是以5H114.3为主，但FK2及更新的FK8全部改为5H120 ，中心孔则依然是本田的标准64.1mm
，螺丝也依然是M14*1.5。

图：前制动卡钳由Brembo代工，制动碟直径为351mm ，后制动碟为305mm
。因为车重高达1380公斤
，原厂制动皮的摩擦系数一般，车主换上了Mugen金皮对应 ，制动效能有所进步。

此车主人是国内改装界的名人座驾
，此君名下还有991?GT3?RS及早前的FK8?Type?R等等，但最喜欢开的还是这台FK2 ，主要原因还是它简单直接、而且体积不大
，动力输出设定合理，日常代步一流 ，简单概括一句就是“好开
、好快、好玩
” 。当然，既然是改装界的名人
，座驾当然就不能随随便便原装了事，于是购入全套Mugen内外部件进行升级 ，顿然令这台GT版Type?R的视觉张力更上一层楼
。Mugen推出的空力套件包括了前保险杠 、后保险杠
、及尾翼三大件
，材质均为GFRP，即玻璃纤维增强型塑料 ，三件套售价折合人民币约为3万元
，对于一辆超过50万的高性能跑车而言，这个投资很合理了 ，要知道此代FK2在日本国内的配额只有750辆
，加上全球范围的保有量因FK8的推出而变得稀少。

笔者曾经驾驶过除FK8以外的所有思域Type?R，如果要论驾驶舱的设计 ，个人比较偏爱EP3那种波棍就在手边的设计
，操控起来非常顺手，唯一不足就是没有那么的现代化而已 ，So?What，反正都是手波车
，闭着眼都能摸到就行 。坐到FK2的驾驶位置，首先觉得就是空间确实不如FD2或者EP3那么宽阔 ，但比FN2开扬些
，尤其是那对可调节的Mugen座椅更是将人包裹得严严实实，营造出比原厂座椅更压迫的姿势
。笔者是个机械论者 ，认为一辆车的好与坏
，完全不在品牌、不在价格，而是车厂造车的那份诚意使然 ，而最能感悟到这种诚意的
，一个是车架悬挂设计和设定 、二个就是驾驶舱布局，但总体而言 ，FK2并不算我喜欢的类型
，如果要选欧规的三款Type?R驾驶舱谁最打动我，首选EP3
、其次是FN2 ，Sorry了，最后才是FK2。

图：相比较之下
，FK2的驾驶舱带有很强烈FN2时代的影子，只是某些布局稍稍作了修改、而已 。

座椅是Mugen的可调式MS-Z ，连凳架每张售价约为1.32万人民币
，整张座椅全部聚氨酯定型，以保持最佳的乘坐感 ，将大腿 、腰部
、肩部包裹得严严实实
，实属对抗G-Force的利器
。

包裹上干碳纤材质的波棍头，直径为50mm ，握持手感一流
，有红色版和黑色版，售价均为19,440日元 ，约为1300元人民币
，还是那句话，金钱有价 ，手波车的情怀无价，更何况你要天天摸着的地方用贵点儿又何妨呢？

思域门下第五款Type?R车型在国内车坛上早已不算新车或者稀有车款
，毕竟从2016年开始已经有为数不少的FK2在国内落地、上牌 、行走，相对于其性能及操控潜力 ，售价从最早六十多万降至后来的五十多万
，其实非常超值，首先它是首辆正式进口国内的Civic?Type?R ，别说什么情怀不情怀的
，以一辆好车的身份就有资格叫价，其次是技术水平 ，虽然仍沿用上代类似的前麦弗逊
、后扭力梁布局
，但谁说扭力梁就没有性能了，相反地 ，如果类似长赛道环境下
，你不见FK2和RS275的竞相辉映吗？但FK2唯一不能让笔者觉得讨好的是其略带“试验品”的属性，有点儿不爽 ，生产不到一年（2015年12月至2016年4月）便退位给第十代、第六台思域Type?R车型接棒，而所有在FK2上成功的配置全数移交FK8
，而后者比它的设定大了10匹 、重了10公斤！

本文来源于汽车之家车家号作者，不代表汽车之家的观点立场。

方法一：

在游戏Crysis路径内容的最后加上 -DEVMODE ，例如("C:\Program Files\Crysis\bin32\Crysis.exe" -DEVMODE)

进入游戏后按下:

F1 启动或关闭第三人称视角

F2 跳至下一个检查点

F3 启动或关闭穿墙模式(对于山洞被石堆堵住的Bug很好用)

F4 启动无敌或关闭

F10 跳至前一个检查点

右方的数字键1 获得火箭发射器、散弹枪及SCAR步枪

右方的数字键2 弹药无限

右方数字键的Enter 侦错模式选单

方法二：

游戏中直接按下"`"启动console视窗
，然后输入：

r_displayinfo 0 移除Devmode模式在右上角所产生的执行状态

g_godmode 1 无敌模式

i_noweaponlimit 1 取消携带武器数量的限制

i_unlimitedammo 1 无限弹药

i_giveallitems 获得所有武器

g_suitSpeedMult = 2 获得超人般的速度

ai_UseAlternativeReadability 让北韩士兵说韩语

若要获得无限能源的夜视镜，请输入：

hud_nightVisionConsumption = 0

hud_nightVisionRecharge = 999

扩展资料：

背景剧情

地球 ，2019：一颗庞大的小行星在地球坠毁 。朝鲜政府迅速封锁了事发岛屿
，并且声称这颗小行星归属朝鲜
。美国也立即派遣了一个三角洲精英小组前往观察形势。

就在美朝政府关系日益紧张之际，神秘的小行星突然爆开 ，飞出一只高度2km的超大外星飞船 。

这只飞船制造出一个庞大的圆形力场
，冻住了小岛的大部分地区，并且极大地改变了地球气候。外星人开始入侵地球
。

参考资料：